破解HPLC色譜峰面積重現(xiàn)性差難題

在使用高效液相（HPLC)色譜系統(tǒng)進(jìn)行日常分析檢測的過程中，有時會遇到色譜峰峰面積重現(xiàn)性差的問題，導(dǎo)致無法對組分進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

重現(xiàn)性是指不同分析人員或不同實驗室在各自的條件下所得分析結(jié)果的精密度，即使是給到了相同的開發(fā)方法也會有方法不重現(xiàn)的時候，這是什么原因呢？可以從色譜柱、儀器系統(tǒng)、方法本身的穩(wěn)定性這三方面去排查。

首先檢查色譜柱的性能是否完好，觀察色譜峰形和柱效變化情況，確認(rèn)色譜柱是否被污染。如果色譜柱被污染，可以使用更強的洗脫溶劑沖洗色譜柱。

如果是由于更換色譜柱導(dǎo)致方法不能重現(xiàn)，那么就是色譜柱間的差異問題，同一種鍵合相，不同廠家的會不一樣，同一廠家的也有很多款，即使同一款色譜柱，還有批次差異問題。但一般情況下，同一款色譜柱，批次差異都是比較小的。

2）流動相的pH與待分析物的pKa接近。

3）對流動相比例敏感，盡量使用同一臺儀器，或者流動相預(yù)混并記錄好具體混合方法，包括試劑的添加順序，甚至記錄量取時的試劑溫度。

4）緩沖溶液的pH須在加入有機(jī)相前進(jìn)行調(diào)節(jié)。

高效液相色譜方法重現(xiàn)性好是確保分析結(jié)果可靠性的關(guān)鍵因素。可以通過色譜柱、儀器系統(tǒng)、方法本身的穩(wěn)定性這三方面去排查和優(yōu)化，有效提升HPLC色譜峰面積的重現(xiàn)性，為科研和生產(chǎn)提供更加準(zhǔn)確、可靠的分析數(shù)據(jù)支持。