在高效液相色譜分析中,基線是指色譜柱經(jīng)流動(dòng)相沖洗,與流動(dòng)相達(dá)到平衡后,檢測(cè)器在一段時(shí)間內(nèi)測(cè)出的信號(hào)曲線。在色譜儀各項(xiàng)檢測(cè)條件正常的情況下,基線應(yīng)平行于時(shí)間軸。然而,高效液相色譜基線不穩(wěn)定可能由多種因素導(dǎo)致,這些因素涉及液相色譜系統(tǒng)的多個(gè)組成部分。以下是一些常見的原因及其相應(yīng)的解決方法:
原因:色譜柱在更換流動(dòng)相或長時(shí)間未使用后,需要一定的時(shí)間來達(dá)到平衡狀態(tài)。在平衡過程中,基線可能會(huì)出現(xiàn)波動(dòng)。 解決方法:使用中等強(qiáng)度的溶劑沖洗色譜柱,特別是在更換流動(dòng)相時(shí),應(yīng)先用10到20倍體積的新流動(dòng)相進(jìn)行沖洗,以確保色譜柱充分平衡。 原因:色譜柱中的氣泡會(huì)影響流動(dòng)相的流動(dòng)性和色譜峰的形狀,從而導(dǎo)致基線不穩(wěn)定。 解決方法:在檢測(cè)器的水池出口加負(fù)壓調(diào)節(jié)器,以減少氣泡的生成。同時(shí),檢查色譜柱的連接處是否緊密,防止空氣進(jìn)入。
原因:流動(dòng)相中的溶解氣體會(huì)在色譜柱內(nèi)析出,形成微小氣泡,影響基線穩(wěn)定性。 解決方法:對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行超聲波脫氣處理,時(shí)間一般為15-30分鐘。或者通過充氮等方式去除溶解氣體。 原因:流動(dòng)相的配比或流速的變化會(huì)直接影響色譜峰的分離效果和基線穩(wěn)定性。 解決方法:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整流動(dòng)相的配比和流速,并定期檢查流動(dòng)相的組成及流速,確保其穩(wěn)定性。
原因:止回閥堵塞會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相流動(dòng)不暢,引起基線波動(dòng)。 解決方法:拆除單向閥,用超聲波在純水中浸泡20分鐘以上,清除堵塞物。 原因:墊片損壞會(huì)導(dǎo)致泵壓不穩(wěn),進(jìn)而影響基線穩(wěn)定性。 解決方法:更換高壓泵的密封墊,確保泵壓穩(wěn)定。 原因:泵中的氣泡會(huì)隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱,影響基線穩(wěn)定性。 解決方法:檢查泵的進(jìn)液口和排液口,確保無氣泡產(chǎn)生。如有必要,可拆開泵體進(jìn)行清洗和排氣。
原因:如果檢測(cè)器的波長沒有設(shè)置在樣品的最大吸收波長處,會(huì)導(dǎo)致基線不穩(wěn)定。 解決方法:將探測(cè)器的測(cè)試波長調(diào)整到樣品的最大吸收波長處。 原因:長期使用后,檢測(cè)器內(nèi)部可能會(huì)積累污染物,影響基線穩(wěn)定性。 解決方法:定期清洗檢測(cè)器,去除污染物。可以使用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑進(jìn)行沖洗。
其他因素
原因:柱溫的微小變化都可能引起基線的波動(dòng)。 解決方法:控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測(cè)器之前使用熱交換器來穩(wěn)定溫度。 原因:系統(tǒng)中可能存在漏液點(diǎn),導(dǎo)致流動(dòng)相流失和基線不穩(wěn)定。 解決方法:檢查管路接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液等,確保系統(tǒng)密封性良好。
綜上所述,高效液相色譜基線不穩(wěn)定可能由多種因素導(dǎo)致。在解決問題時(shí),需要綜合考慮色譜柱、流動(dòng)相、泵、檢測(cè)器以及系統(tǒng)其他部分的狀況,并采取相應(yīng)的措施進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。
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