在高效液相色譜(HPLC)技術(shù)中,常用的手段是利用柱上手性固定相,例如氨基柱和疏水柱,分離不同的化合物,本文將比較氨基柱和疏水柱的優(yōu)缺點,以及在不同條件下選擇和分離理想樣品的建議。
氨基柱和疏水柱是常用的手性固定相,在分離手性化合物時經(jīng)常使用,氨基柱上的手性固定相通常是一種氨基酸衍生物,常用的是L-芯氨酸,氨基柱是親水性柱,能夠與分子中的極性官能團相互作用,對于帶有酸性基團的化合物具有良好的分離效果,疏水柱通常是碳基固定相,例如C18碳鏈固定相,疏水柱是疏水性柱,適用于分離非極性化合物和含有芳香環(huán)的化合物。
在選擇合適的柱子之前,需要先理解樣品的化學(xué)性質(zhì),對于有不同官能團(如酮,醛,羥基等)的手性化合物,可以選擇氨基柱進行分離,而對于含有非極性團體的手性化合物,可以選擇疏水柱進行分離,此外,還需要考慮樣品所處的pH條件,氨基柱在中性到堿性的pH條件下分離效果較好,而在酸性條件下其它替代柱子可能更加適合,疏水柱通常在酸性條件下分離效果較好,因此,在選取柱子之前,需要基于樣品的特征和實驗條件加以綜合考慮。
當(dāng)分離需要許多組分或試樣含有峰的時候,氨基柱的選擇則會更具有優(yōu)勢,由于氨基柱能夠與帶有酸性基團的化合物相互作用,因此氨基柱的選擇可以有助于減少含水/無機緩沖鹽濃度對于性能的影響,特別是在需要分離天然合成物或者試樣含有多種官能團的化合物時,這種優(yōu)勢格外突出。
相比之下,疏水柱更加適合分離一些含有不同親水度基團的化合物,如有正負電荷或不同化學(xué)性質(zhì)的碳氫化合物,在疏水柱上,那些能夠形成氫鍵的,或者是含有芳香環(huán)的化合物可以更容易地得到分離,而且疏水柱也具有較好的選擇性,不會受到水和緩沖鹽的影響,因此,在選取柱子時,可以在實驗中考慮疏水柱的選擇。
總之,當(dāng)考慮到選用氨基柱和疏水柱時,需要綜合考慮實驗中所需的選擇性,穩(wěn)定性和分離效果,較后,我們可以選擇適合的柱子,在不同條件下(如pH值)下分離理想的樣品,隨著親和層析技術(shù)的不斷發(fā)展,分析者可以利用柱子的選擇性較好地分離復(fù)雜樣品,從而得到精確的分析結(jié)果。
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