色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。
1、硅膠純度:硅膠純度和殘留金屬離子濃度,硅膠的雜質(zhì)會影響化合物的峰形,硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形,易發(fā)生拖尾。
2、色譜柱尺寸填料床的長度和內(nèi)徑,增加色譜柱長度,可以在一定程度上提高柱效,但也會升高壓力和導(dǎo)致峰展寬;寬柱徑,提高載樣量,但也會增加橫向擴散,同樣會導(dǎo)致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑,可減少橫向擴散,但壓力較大,對系統(tǒng)要求較高。
3、顆粒形狀及粒徑球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻,不規(guī)則形柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動相線速度不均勻,容易譜帶展寬;平均顆粒直徑,粒徑越小,柱效越高,柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低,壓力越大。
4、顆粒表面積:顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和,以m2/g表示,相對而言高表面積對樣品具有較強的保留能力,更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達到平衡狀態(tài),更適合梯度洗脫程序。
5、孔徑:顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍是80~300?,大孔徑的填料顆??梢匝娱L大分子溶質(zhì)在填料表面的滯留時間,改善分離,所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子。
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